TEV-протеазаЗаказать

Скачать инструкцию на русском

Настоящий продукт является рекомбинантной версией каталитического домена белка ядерного включения вируса гравировки табака (Tobacco Etch Virus). Фермент содержит на N-конце гистидиновую метку и имеет молекулярную массу 28,5 кДа. TEV-протеаза расщепляет белки по специфическому сайту из семи аминокислотных остатков следующего состава: Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Glu-Х (E-N-L-Y-F-Q-Х). При этом седьмым аминокислотным остатком может быть один из шести: серин (S), глицин (G), аланин (A), метионин (M), цистеин (C) или гиститдин (H) [1]. Расщепление происходит между Глутаминовым и Х аминокислотными остатками (Gln-Х).
TEV-протеаза инактивируется прогреванием при 65°C в течение 10-15 минут. Так же, фермент ингибируется присутствием в реакционной смеси 40% глицерина, 5 мМ Zn2+, 1 мМ Cu2+ и 10 мМ Co2+, 200 мM NaCl, 2 М мочевины, 500 мМ гуанидин гидрохлорида, 50 мМ имидазола.

TEV-протеаза сохраняет активность:

• • в присутствии 10 мМ MgSO4, MnCl2 и CaCl2, 100 мМ ЭДТА;
• • в присутствии ингибиторов протеаз, таких как апротинин, бензамидин, пепстатин, фенилметилсульфонил фторид;
• • при рН 6,0 – 9,0;
• • температуре от 4°С до 37°С.

 
Источник
TEV-протеаза выделена из штамма E.coli, содержащего плазмиду с клонированным фрагментом гена каталитического домена белка ядерного включения вируса гравировки табака (Tobacco Etch Virus).
 
Единицы активности
Одна единица активности соответствует количеству фермента, необходимому для  расщепления 2 мкг химерного рекомбинантного белка (~145 кДа, MBP-Bst) до глубины гидролиза 90% в общем реакционном объеме 10 мкл за 1 час при 30°C в стандартном реакционном буфере. Состав стандартного реакционного буфера: 50 мМ Tris-HCl (pH 7,5 при 25°C), 0,5 мМ EDTA и 1 мМ DTT (1мл 10х буфера поставляется вместе с ферментом).

Концентрация: 5000 ед/мл
 
Контроль качества
Каждая партия фермента тестируется на активность фермента, электрофоретическую чистоту в SDS-ПААГ, отсутствие неспецифической протеолитической активности.
 
Буфер хранения
Фермент находится в растворе следующего состава: 50 мМ Трис-HCl, рН 7,5, 250 мМ NaCl, 1 мМ EDTA, 1 мМ TCEP, 50% глицерин.
 
Условия для проведения реакции
Реакционный буфер: 50 мМ Tris-HCl (pH 7,5), 0,5 мМ EDTA и 1 мМ DTT. Оптимальная температура реакции 30°С. Время реакции и соотношение субстрата и фермента подбирается эмпирически, в зависимости от природы субстрата. Допускается проведение реакций при 4°С в течение длительного времени (16-24 часа).
 
Область применения
TEV-протеаза может применятся для расщепления слитых рекомбинантных полипептидов, имеющих сайт узнавания протеазы между лидерным фрагментом и целевым белком. Наличие гистидиновой метки у TEV-протеазы позволяет очищать целевой белок от фермента с помощью металл-хелатной аффинной хроматографии.
 
Условия хранения и транспортировки
Хранить при температуре –20°C.
Допускается транспортирование при температуре не выше +8°C в течение двух суток.