Taq ДНК-полимеразаЗаказать

Описание
Taq ДНК-полимераза - единый полипептид с молекулярным весом около 95 кДа. Полимераза высокопроцессивна, позволяет амплифицировать фрагменты длиной до 10 тысяч пар оснований. Фермент обладает выраженной 5'-3' экзонуклеазной активностью и аденилтрансферазной активностью. Трансферазная активность приводит к добавлению единичного рА на оба 3' конца двуцепочечной ДНК, полученной в ходе амплификации. Фермент обладает активностью, указанной на этикетке, при 74оС и рН 8,8.
Ионы Mg2+ абсолютно необходимы для проявления активности Taq ДНК-полимеразы. Фермент наиболее активен в интервале концентраций Mg2+ 0,5-6mM.

Источник

Taq ДНК-полимераза очищена из штамма E.coli, содержащего плазмиду с клонированным полноразмерным геном ДНК-полимеразы Thermus aquaticus.

Единица активности

Одна единица активности соответствует количеству фермента, необходимому для включения 10нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию ДНК за 30 мин при 74ºС. Условия измерения активности - 50 mM Трис-НCl, рН 9.0 (при 25 °С), 50 mM KCl,  200 µM каждого из dNTP, включая  [³H]dTTP, 1,5 mM MgCl2,  0,25 mg/ml активированной ДНК из тимуса телёнка.

Контроль качества  

Каждая партия фермента тестируется на активность фермента, электрофоретическую чистоту в SDS-ПААГ, отсутствие эндонуклеазной и неспецифической экзонуклеазной активности, отсутствие бактериальной и эукариотической ДНК.

Буфер хранения

Фермент находится в 10 mM Tris-HCl (pH 7,4 при 25°С), 100 mM KCl, 0,1mM EDTA, 1 mM DTT, 0,5% IGEPAL CA-630, 0,5% Tween 20, 50% глицерин.

Условия для проведения реакции  
50 mM Трис-НCl, рН 9.0 (при 25 °С), 50 mM KCl,  1,5 mM MgCl2, 200 µM каждого из dNTP

Буфер для проведения реакции (10x) E-3000  (приобретается отдельно): 100 мM Трис-HCl, рН 8.5 (при 25 °С), 500 мM KCl, 0.5% (v/v) Tween 20, стабилизаторы Taq ДНК-полимеразы.

Применение   ПЦР, ведение метки в ДНК.